高效液相色谱柱怎么装柱及使用介绍

高效液相色谱柱怎么装柱

1. 色谱柱应该是可以直接接在匀浆罐上的，如果不能，则需要一个转换接头。这个转换接头的尺寸很重要，既要能防止漏液，又要避免过硬或尺寸不合适而导致色谱柱接口螺纹的损坏；

2. 具体装柱过程一般来说是①先以合适的匀浆液（多为有机溶剂，刘国诠老师的《色谱柱技术》一书中列的比较全，可供参考）将填料充分分散（可以借助搅拌、超声等方式）；②在填料匀浆的过程中，完成准备工作，即把色谱柱接在匀浆罐的下端（色谱柱不接匀浆罐的一段要接好筛板和柱头，确保拧紧但不能拧死以免损坏色谱柱），打开匀浆罐上端和气泵之间的接头以便灌入匀浆液；③匀浆液罐好后，接好匀浆罐上端接头，开始加压；④选择合适的压力，就可以把填料压实了；⑤稳定在适当的压力上压一定时间后，卸掉压力，卸下色谱柱，把接匀浆罐这一段的填料抹平，装上筛板和柱头即可使用。

3. 装柱是个困难的过程，需要耐心摸索压力、匀浆液体积等参数，才能确保柱床均匀密实，达到好的柱效和峰形。如果装的不好，则可能出现柱效不够，或拖尾等问题。

 柱子使用

1、首先要确认您所要分析的样品流动相的pH范围是否在您的柱子的pH范围之内，以免损坏柱子硅胶！

2、接下来就是用你做样品的流动相去平衡柱子，如果您的流动相中含有缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去过渡10倍柱体积(150x4.6mm柱子约为30ml，250x4.6mm柱子约为45ml；下同)以上，再用带盐的流动相去平衡柱子足够的时间(直到基线非常平稳为止)，之后方可进样分析。

3、无论您分析何种样品，都会由于各种原因样品中总有部分杂质，因此建议您在进样前在柱子前端加接保护柱以保护您那昂贵的分析柱，或者用0.2um或 0.45um针头过滤器过滤样品后方进样分析！

高效液相色谱柱柱子清洗

分两种情况进行：

1、  如果您的样品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流动相(包括流动相里面加了点酸)，在做完样品后可直接用65％的乙腈/水或者纯甲醇进行清洗10倍柱体积即可保存(如果时间有限，可视情况在仪器能承受的范围内加快流速******为2ml/min)；

2、  如果您的样品分析用到了含缓冲盐或者酸或者离子对试剂的流动相，在做完样品后的清洗必须按照下列2个步骤进行清洗柱子(不论您的柱子是否可以耐纯水的极性柱子还是一般的通用性柱子)：

a、***重要的步骤——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱体积溶剂以上，1~2ml/min(根据时间自由调节流速：如果因为时间来不及而清洗不了那么长时间，可以适当加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子应以0.2~0.5ml/min的流速进行)，