液相色谱柱使用维护与保养

液相色谱柱使用前应仔细阅读说明书，注意色谱柱的使用温度、pH值范围、所用缓冲盐的种类等。

1、新色谱柱在使用前，先用纯甲醇在254nm波长下处理，直至基线冲平为止，然后用甲醇:水=10:90（V:V）冲柱子，直到基线冲平为止。

2、一般反相色谱柱使用方法：先以甲醇:水=10:90（V:V）冲洗柱子45分钟，再换上流动相平衡45分钟，根据基线情况进样（基线漂移不符合要求时应延长平衡时间），分析样品完毕，流动相继续20分钟（或20分钟又上），使用缓冲盐（或含盐）作流动相，应用不含缓冲盐（作同量的水代替缓冲盐）的流动相冲洗色谱柱，使色谱柱中的盐*洗掉。再换上甲醇:水=10:90（V:V）冲洗柱子45～60分钟，然后再用100%甲醇冲40分钟，再放置保存。

注意：不能用纯有机溶剂直接冲洗色谱柱，防止盐析出，堵塞色谱柱或仪器管路，而使色谱柱报废。

3、一般正相色谱柱使用方法：zui常用的流动相是水和乙腈混合物。先用乙腈:水=85:15(V:V)冲洗柱子45分钟，再换上流动相平衡45分钟，根据基线情况进样（基线漂移严重应延长平衡时间），分析样品完毕，流动相继续20分钟（或20分钟以上），再换上乙腈:水=85:15（V:V）冲洗柱子45～60分钟，放置保存。

4、特殊色谱柱（手性柱或异构体柱子）使用时，除仔细阅读说明书外，还需向所购买单位详细咨询使用方法及注意事项，确认无误后，方可使用。

5、在替换溶剂时，应确保系统和色谱柱中的溶剂与新溶剂互溶。如果两种溶剂互溶性和物理性质未知，可以把两种溶剂倒在烧杯中观察，以避免直接进入HPLC系统可能出现不互溶的问题。

6、对于反相柱，长期保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。正相柱可以储存于严格脱水后的纯正已烷中，储存的温度按照说明书要求储存。

7、柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。

8、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会影响柱内填料状态，因此在调节流速时应该缓慢进行。

9、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱柱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。

10、如使用柱温控制装置时，应注意在通入流动相后才能升温。温度波动会引起色谱峰漂移并产生多种影响。使用色谱柱时，保持柱温恒定非常重要。填料粒度不同也是选择和考虑色谱柱使用温度的因素之一。粒径小于5μm的填料在温度升高时柱床更容易塌陷，使柱效下降。如果运用得当，柱温也是改善色谱分离的一个有效办法，降温可以增加保留时间、提高选择性和分离度等，升温则相反。

11、一般色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲。

12、色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。